Para la explantación se deben utilizar tejidos vegetales en estructura primaria, para que se reproduzcan con facilidad es importante que sean tejidos jóvenes y quizás con insinuaciones de tejido meristemático, es decir, es fundamental que estos tejidos explantados sean vitales.
Para determinadas especies existen preferencias biotecnológicas a la hora de elegir el explante más adecuado para la génesis de la planta in vitro; por ejemplo, la raíz pivotante (raíz) se utiliza para el cultivo biotecnológico de zanahorias.
El tipo de explante utilizado también influye en el crecimiento más o menos atrofiado del callo; Por tanto, una elección razonada del tipo de explante permite una cultura biotecnológica más eficaz.
Creación de un sistema cerrado que permita el crecimiento condicionado del cultivo in vitro.
Las células del explante tienen una caracterización tisular específica, por lo que deben estar acondicionadas para perder esta diferenciación y dividirse de forma indiferenciada, de ahí la importancia de adoptar un medio de cultivo adecuado. El medio de cultivo es básicamente un caldo rico en elementos nutricionales, como sacarosa, sales simples y complejas. El medio de cultivo debe dirigir el gasto energético de las células indiferenciadas hacia la vía secundaria del metabolismo; para ello, en el laboratorio se coloca el sistema en la oscuridad, evitando que la célula vegetal consuma sus reservas de energía para realizar la fotosíntesis; si se produce la fotosíntesis, a menudo esto no es suficiente para satisfacer las necesidades energéticas del cultivo in vitro.
Entre los constituyentes del suelo encontramos el ácido indolacético, una de las hormonas vegetales responsables del desarrollo morfológico y fisiológico específico de una célula; pequeñas concentraciones de estas moléculas determinan grandes cambios en el metabolismo y morfogénesis de una célula o tejido vegetal. La presencia de hormonas vegetales en el interior del caldo de cultivo juega un papel fundamental en la pérdida de caracterización tisular de las células explantadas, para generar células totipotentes, las cuales pueden ser dirigidas al metabolismo más productivo. Los constituyentes del medio de cultivo son las herramientas que el tecnólogo puede variar para obtener un producto biotecnológico específico.
Otra característica del medio de cultivo es el pH ácido.
En la base de esta rama de la biotecnología se encuentra la fisiología vegetal, que es el estudio de cómo funciona una célula vegetal; si es bien conocida, la fisiología vegetal da al biotecnólogo nociones fundamentales sobre las sustancias nutricionales involucradas en el metabolismo celular. El suelo celular es el resultado de muchas experiencias e intentos sobre una base cualitativa. Las evidencias experimentales han afirmado las necesidades reales y esenciales de las células vegetales in vitro; sin embargo, el problema cualitativo también se suma al cuantitativo: las concentraciones de las sustancias. utilizados son de hecho tan importantes para un crecimiento adecuado.
Para diferentes especies, se pueden usar los mismos nutrientes, pero a diferentes concentraciones o componentes diferentes. También es posible que los cultivos in vitro de explantes derivados de una misma planta tengan diferentes características funcionales y biotecnológicas; Dependiendo del tipo de explante utilizado, los metabolitos que se pueden obtener también cambian en relación al diferente manejo del medio de cultivo. Está claro, sin embargo, que para gestionar un cultivo de la mejor forma posible es necesario conocer en profundidad las vías metabólicas de la célula vegetal del explante, para poder activarlas o desactivarlas mediante Los nutrientes introducidos Una célula indiferenciada in vitro también puede expresarse de una manera metabólicamente diferente a como se expresaría en un tejido cultivado naturalmente.
Hay medios de cultivo preenvasados, para facilitar los primeros pasos del paso del cultivo in vitro; estos suelos se pueden modificar según el tipo de explante, la especie y el resultado que queramos obtener. Para que el callo se convierta en un elemento productivo desde el punto de vista biotecnológico, es necesario transferir parte del material celular a un medio líquido agitado. En este punto es necesario evaluar cómo proceder según el propósito: mejora agronómica, biotransformación, biomasa o producción de principios activos.
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